à propos Foire aux questions

Le sérum est décongelé à 2-8°C pour éviter toute dégradation ; il peut également être décongelé à température ambiante en agitant périodiquement pour remettre le contenu en suspension.

Le sérum décongelé doit être mélangé soigneusement avant d’être ajouté au milieu de culture cellulaire.

Les températures supérieures à 37°C peuvent compromettre la performance du sérum en accélérant la dégradation des facteurs sériques critiques, et doivent être évitées en laboratoire.

Une turbidité et des matières floculantes peuvent être présentes après la décongélation ou après une congélation et/ou une réfrigération prolongée. Notre expérience indique que ces modifications n’affectent pas les performances biologiques du sérum.

Certains des précipités sont dus à la fibrine : Nos procédures de collecte et la congélation rapide peuvent laisser un peu de fibrinogène dans le sérum.
Le fibrinogène est le précurseur soluble de la protéine de formation de caillots, la fibrine. La fibrine peut apparaître après décongélation ou inactivation par la chaleur. La fibrine n’altère pas la capacité du sérum à favoriser la croissance cellulaire.

Il est recommandé d’utiliser le sérum sans traitement (filtration ou centrifugation).

Certains précipités sont dus au phosphate de calcium : Le sérum qui est incubé à 37°C pendant des périodes prolongées devient trouble et des dépôts peuvent apparaître. Ils sont composés de calcium et de phosphore.
À notre connaissance, cela n’altère pas les performances du sérum dans les cultures cellulaires.

Pour la plupart des applications de culture cellulaire, l’inactivation thermique du sérum n’est pas recommandée. L’inactivation par la chaleur dégrade les protéines du complément qui peuvent interférer avec les tests immunologiques.
Le chauffage du sérum pendant des périodes prolongées peut réduire ou détruire les facteurs de croissance, ainsi qu’augmenter la formation de dépôts qui sont souvent confondus avec une contamination microbienne.

Commencez par décongeler le sérum et le flacon de sérum de contrôle à 2-8°C. Remuez le sérum en bouteille pour éviter la formation d’un précipité pendant la décongélation, puis placez-le dans le bain-marie réglé à 80°C.

Lorsque la température du flacon témoin atteint 50°C, réglez le thermostat du bain à 70°C ; lorsque la température du flacon atteint 55°C, changez le thermostat à 60°C.

Lorsque le sérum atteint la température de 56°C, utilisez un minuteur (30 minutes est le temps enregistré) et changez le thermostat du bain-marie à 56°C. Pendant ces 30 minutes, vérifiez régulièrement la température et maintenez-la stable en ajustant le thermostat, en ajoutant de l’eau froide et en abaissant ou non le couvercle. Remuez le sérum toutes les 5 à 10 minutes.

Conserver le sérum à température ambiante pendant 30 minutes, puis congeler le sérum à -20°C.

Note :
L’agitation est cruciale pour la bonne qualité du sérum. Si le sérum n’est pas correctement mélangé, un précipitant de sels, de protéines et de lipides apparaîtra, et permettra la formation de dépôts cristallins et de flocons.
Ces dépôts ne sont pas toxiques pour la culture cellulaire mais affectent l’aspect et la consistance du sérum. Le chauffage du sérum pendant de longues périodes peut détruire les promoteurs de croissance, ce qui peut également permettre la formation de dépôts.

Le sérum peut être stocké entre +2 et +8°C jusqu’à 8 semaines sans que ses performances ne soient diminuées (*).

Des études internes à Biowest ont montré que pendant 26 semaines de stockage (entre +2 et +8°C) la capacité du sérum à favoriser la croissance cellulaire n’a pas été significativement altérée.

(*) Art to Science, Vol.19, No.2, “Serum Stability at Refrigerated Temperatures (2-8°C)”.

Le sérum doit être conservé congelé et protégé de la lumière.
La température de conservation recommandée est de -10°C à -40°C.

S’il sont conservés à des températures inférieures à -40°C, les flacons peuvent devenir fragiles, ce qui augmente le risque de casse.

Certaines préparations de trypsine contiennent du rouge de phénol. Comme le produit est expédié avec de la glace carbonique, il peut y avoir une accumulation importante de CO2 dans l’emballage.

Ce CO2 peut pénétrer dans la solution et abaisser légèrement le pH, donnant une couleur orange (environ pH 6,5) ou rosâtre (environ 7,3). La solution, si elle est orange (acide), peut encore être bonne à utiliser telle qu’elle, ou de l’hydroxyde de sodium peut être ajouté pour ajuster le pH.

Les tétracyclines sont une famille d’antibiotiques à large spectre qui inhibent la synthèse des protéines bactériennes en bloquant la liaison de l’aminoacyl-ARNt au ribosome. En raison des préoccupations croissantes concernant le développement de microbes résistants aux antibiotiques, l’utilisation de la tétracycline comme promoteur de croissance a été interdite dans l’UE au début des années 1970.

Toutefois, dans le reste du monde, la tétracycline figure toujours parmi les antibiotiques les plus fréquemment utilisés dans les élevages.

Depuis 1992, le système d’activation transcriptionnelle contrôlé par la tétracycline, ou les systèmes “Tet-Off” et “Tet-On” comme on les appelle souvent, est utilisé pour l’induction de l’expression mammalienne dans les modèles de lignées cellulaires utilisés dans les laboratoires du monde entier.

Dans le système Tet-Off, l’expression des gènes est réduite au silence en présence de tétracycline et l’induction de l’expression se fait par élimination de la tétracycline du milieu.
À l’inverse, dans le système Tet-On, l’expression des gènes est réduite au silence en l’absence de tétracycline et induite par l’ajout de tétracycline au milieu de culture cellulaire.

Les deux systèmes sont très sensibles à la tétracycline, même en petite quantité, présente dans le SVF.
Par conséquent, si un chercheur utilise ces outils pour contrôler l’expression génétique dans ses modèles de culture cellulaire, il est très important de disposer d’un approvisionnement en SVF totalement exempt de tétracycline.

N’hésitez pas à contacter votre représentant Biowest pour plus d’informations ou pour vous aider à sélectionner le lot le mieux adapté à votre application sensible à la tétracycline.

Le sérum humain provenant de donneurs de type AB est déficient en anticorps contre les antigènes des groupes sanguins A et B. Il minimise donc l’immunoréactivité puisque la plupart des utilisateurs de sérum humain travaillent sur des cellules du système immunitaire.

Les femmes qui ont été enceintes peuvent développer des anticorps contre les antigènes de la classe majeure d’histocompatibilité (CMH) portés par les cellules du père et/ou du fœtus.

Les donneurs masculins ne présentent pas de tels risques.

Il existe un large éventail d’applications pour le sérum de veau fœtal. La plus importante est dans le domaine des produits biopharmaceutiques et des vaccins. Il est utilisé dans la recherche, la fabrication et le contrôle des vaccins humains et vétérinaires et des médicaments, dont beaucoup sont à la pointe du développement.

Le sérum de veau fœtal est également très utilisé dans la recherche.

Le SVF est prélevé sur les fœtus des vaches gestantes, abattues conformément aux directives de l’OIE (Organisation mondiale de la santé animale) et aux normes d’inspection vétérinaire internationalement reconnues.

L’OIE (Organisation mondiale de la santé animale) est une organisation intergouvernementale créée en 1924.
En 2011, l’OIE comptait 178 pays et territoires membres.

Ses missions sont :
– d’assurer la transparence de la situation mondiale des maladies animales
– de collecter, analyser et diffuser l’information scientifique vétérinaire
– de fournir une expertise et encourager la solidarité internationale dans la lutte contre les maladies animales
– de préserver le commerce mondial en publiant des normes sanitaires pour le commerce international des animaux et des produits d’origine animale
– d’améliorer le cadre juridique et les ressources des organisations nationales de services vétérinaires.

Le SVF est essentiellement un produit naturel.

Tous les lots de SVF sont uniques, avec des caractéristiques spécifiques, différentes de tous les autres lots.

La disponibilité du SVF diminue.

Les prix de la viande et des veaux augmentent, car les consommateurs de certains pays augmentent leur consommation de viande bovine, et les techniques d’élevage bovin s’améliorent en permanence.

Ces facteurs combinés entraînent une diminution de la fréquence des vaches gestantes à l’abattage. La collecte de SVF dans de nouveaux pays a, pendant de nombreuses années, compensé la diminution de l’offre, mais il n’y a plus de nouveaux pays producteurs disponibles.

L’offre mondiale actuelle est faible et ne cesse de diminuer.

L’origine du sérum n’a aucune influence sur la croissance cellulaire. Biowest a comparé la croissance cellulaire dans du SVF provenant de sept pays différents sur trois continents, et a confirmé que, quel que soit le pays d’origine, toutes les lignées cellulaires testées avaient la même performance moyenne.

Un lot de SVF peut donner de bons résultats pour une lignée cellulaire spécifique, mais pas pour une autre. La “qualité du sérum” est spécifique à chaque lignée cellulaire. C’est pourquoi le test du SVF est largement utilisé lorsqu’il s’agit de lignées cellulaires sensibles. Biowest effectue l’analyse la plus complète des paramètres biochimiques et des tests sur les lignées cellulaires du secteur, et met les résultats à disposition sur les certificats d’analyse.

Il existe une énorme différence de prix entre les pays classés comme “exempts de fièvre aphteuse sans vaccination”, pour lesquels la demande dépasse l’offre, et les pays classés comme “exempts de fièvre aphteuse avec vaccination”, où l’offre a historiquement dépassé la demande.

La différence de prix a été de plusieurs centaines de pour cent, les utilisateurs de sérum aux États-Unis ayant payé des milliards de dollars de plus que les utilisateurs de sérum dans l’UE. Les propositions de l’USDA visant à harmoniser les règles d’importation des États-Unis et de l’UE pour le SVF lié à la fièvre aphteuse (conformément aux directives de l’OIE) ont été rejetées à plusieurs reprises par l’industrie américaine du sérum.

La source du sérum provient d’un pays approuvé par l’USDA. Cela signifie que le sérum est produit à partir de sang collecté dans des pays qui ont été approuvés par le ministère de l’Agriculture des États-Unis (USDA) pour exporter des produits de sérum de ruminants vers les États-Unis.

Les pays éligibles pour l’exportation de sérum de veau fœtal aux États-Unis sont les suivants Australie, Canada, Chili, Costa Rica, El Salvador, Guatemala, Honduras, Mexique, Nouvelle-Zélande, Nicaragua et Panama.

La demande de SVF augmente parallèlement aux derniers développements de la recherche, notamment les cellules souches, la thérapie cellulaire, les nouveaux vaccins et la protéomique.

Les prix du SVF australien sont plus élevés parce que l’Australie est perçue comme une origine “plus sûre” pour le BSE et les virus bovins.

Le Canada et l’Australie ont été les premiers pays en dehors des États-Unis à produire du SVF. Dans les années 1980, les cas de BSE survenus en Amérique du Nord sont devenus un argument de poids en faveur du SVF australien.

On a fait valoir qu’étant “isolée”, l’Australie était nécessairement l’origine la plus sûre.

Les importations de SVF dans l’UE sont moins limitées qu’aux États-Unis. Une proposition faite par l’USDA en 1994 d’appliquer les mêmes politiques d’importation de SVF que l’UE n’a pas été soutenue par l’industrie américaine du SVF.

L’Association internationale de l’industrie du sérum (ISIA) soutient les efforts d’harmonisation des règles d’importation, suggérant la conformité aux recommandations de l’OIE. En attendant, le SVF aux États-Unis reste plus de deux fois plus cher qu’en Europe.

La traçabilité est importante parce qu’elle fournit une chaîne d’identité du produit depuis le pays et l’abattoir d’origine, jusqu’aux sites de production, de conditionnement et d’étiquetage, prêt pour la vente et la distribution finale.

Comme vous pouvez le vérifier, la traçabilité assure que le produit que vous achetez a été fabriqué en respectant les réglementations à chaque niveau. Cette chaîne d’information ininterrompue est synonyme de transparence totale et de conformité totale.

Biowest contrôle entièrement la chaîne d’approvisionnement, de la récolte de la matière première au remplissage des bouteilles stériles.

Notre traçabilité avec le logiciel de gestion SAP S/4HANA garantit une traçabilité complète du produit, de la matière première jusqu’au produit final. Ce logiciel joue un rôle clé dans la réalisation d’une traçabilité complète du réseau d’approvisionnement, permettant à Biowest de déterminer la lignée des lots et la traçabilité globale.

Un sérum de haute qualité peut provenir de n’importe quel pays, pour autant qu’il soit collecté, importé et traité conformément à toutes les exigences réglementaires et industrielles applicables.
Aucun continent ou pays produisant du SVF n’a d’avantage inhérent, en termes de qualité, par rapport aux autres origines.

Depuis les années 1990, des cas de pratiques illégales ont fait l’objet de rumeurs. Seuls deux cas ont été signalés aux autorités.

En 2004, Biowest s’est rendue compte qu’elle avait acheté et revendu des origines fausses ; et en 2013, GE s’est rendue compte qu’elle avait vendu des produits SVF faussement présentés et frelatés, après avoir acquis la société PAA, qui avait des activités en Autriche, au Canada et en Australie.

Dans les deux cas, les victimes concernées ont été informées et les produits ont été rappelés. D’autres cas sont en cours d’investigation. Ces cas illustrent l’importance d’un contrôle complet de la chaîne d’approvisionnement.

La falisification est la plus dommageable des activités criminelles qui peuvent affecter les utilisateurs de sérum !

Le SVF peut être falsifié par l’ajout d’eau, de facteurs de croissance et/ou de sérum d’autres espèces. Des entreprises peu scrupuleuses, afin d’améliorer les performances et/ou de réduire le coût du produit, peuvent réaliser une ou plusieurs de ces activités ou d’autres similaires.
Ces pratiques sont extrêmement graves car elles affectent les résultats critiques de la recherche en sciences de la vie, ainsi que la pureté des produits finaux obtenus dans les domaines biopharmaceutique, diagnostique ou vaccinal.

Lorsque de tels cas sont détectés, les victimes ayant utilisé un produit frelaté doivent être informées pour permettre d’évaluer les dommages et de prendre des mesures correctives.

On parle de “fausse déclaration” lorsque le produit est mal étiqueté en termes d’origine déclarée, et cela peut être total ou partiel :

– “Totale”, c’est lorsque le SVF provenant d’une origine moins chère est vendu comme s’il provenait d’une origine plus chère ;
– “Partielle”, c’est lorsqu’une origine moins chère et une origine plus chère sont mélangées, par exemple dans la proportion 49-51, et que seule l’origine plus chère 51%- est déclarée. Cela génère un profit illicite pour le vendeur, au détriment des utilisateurs de sérum ; et peut amener les entreprises à violer, sans le savoir, les règlements d’importation ou les fichiers maîtres des produits.

Il est peu probable que les résultats réels de la recherche et les produits finis soient sérieusement affectés, mais les origines falsifiées violent les normes d’honnêteté et de traçabilité du gouvernement, de l’industrie et des consommateurs.

La “contrebande” est un moyen de faire de fausses déclarations, et peut prendre la forme de l’importation d’un produit sous une fausse description ; directement vers une destination finale, ou via un pays tiers.

Les lignes directrices de l’OIE en matière de bien-être animal sont respectées dans les pays où le SVF est collecté (Code terrestre 7.5 de l’OIE sur l’abattage des animaux).

Voir EFSA – Bien être animal

Il existe des alternatives sans sérum spécifiques aux lignées cellulaires, notamment Biowest FreeAdd (S6010).

Dans la plupart des cas, une adaptation cellulaire est nécessaire, les rendements sont plus faibles et les coûts plus élevés.

L’abattage d’animaux gestants est, dans la plupart des cas, un événement non planifié. La fréquence dépend des techniques d’élevage. Dans la plupart des cas, l’état de gestation n’est pas connu. C’est le cas par exemple des bovins qui se déplacent librement et que les génisses et les bœufs sont mélangés.

Aucune vache n’est tuée dans le but principal de récolter le sang fœtal. Le sang est collecté comme sous-produit des opérations d’abattage des bovins pour la viande bovine. L’état de gestation est inconnu lorsqu’un animal entre dans la chaîne d’abattage. Le pourcentage de vaches enceintes allant à l’abattoir est très faible et diminue d’année en année grâce à l’amélioration constante des techniques d’élevage.

La collecte du sang se fait sans causer de douleur au fœtus. La vie du fœtus prend fin par épuisement de l’oxygène, méthode généralement reconnue comme étant douce pour mettre fin à la vie.

La technologie de la culture cellulaire peut réduire l’utilisation d’animaux vivants dans la science. Des recherches sont également menées pour produire de la viande par culture cellulaire, ce qui pourrait à terme conduire à la fin de l’élevage d’animaux pour l’alimentation.

Sauf indication contraire sur les étiquettes des produits, les sérums et les milieux liquides Biowest sont filtrés de manière stérile. La stérilité n’est pas garantie après ouverture. L’utilisation de techniques de manipulation aseptiques est recommandée.

La fièvre aphteuse est pertinente à des fins d’importation réglementaire, mais pas pour la croissance cellulaire. Les États-Unis et quelques autres pays n’autorisent les importations de SVF qu’en provenance de pays exempts de fièvre aphteuse, SANS vaccination, tandis que la plupart des autres pays acceptent les pays exempts de fièvre aphteuse AVEC vaccination.

Les pays exempts de foyers de fièvre aphteuse et de virus de la fièvre aphteuse en circulation, comme l’a vérifié l’OIE, et sont déclarés également sûrs.

L’encéphalopathie spongiforme bovine (ESB), plus connue sous le nom de maladie de la “vache folle”, est une maladie neurodégénérative (encéphalopathie) mortelle chez les bovins.

Selon l’OIE (Organisation mondiale de la santé animale), il n’y a aucun risque de transmission de l’ESB dans plusieurs produits, notamment : le lait, les cuirs et les peaux, la viande désossée, le sang et les sous-produits du sang, tels que le sérum de veau fœtal (Code terrestre 11.4 ESB de l’OIE).

La plupart des pays membres de l’OIE ont adopté cette position, y compris l’Union européenne et les États-Unis (USDA). Pendant un certain temps, l’ESB a été un argument utilisé en faveur de certaines origines. Après que l’OIE ait déterminé que l’ESB n’est pas transmise par les produits sanguins, ces arguments sont devenus obsolètes.

L’échantillonnage pour les tests de stérilité de tous les produits Biowest est conforme aux exigences de la Pharmacopée européenne.

Biowest teste le sérum pour les virus (BVD, IBR, PI3) en utilisant une méthode de culture cellulaire, de sorte à détecter la présence ou non de virus vivant dans le sérum.

Le SVF est parfois irradié aux rayons gamma afin d’éliminer tout risque potentiel de virus.

Au dosage standard de rayons gamma, aucune perte de performance n’est observée sur les premières générations de cellules. Nous ne constatons aucun changement sur les hormones, l’osmolarité, le pH, les endotoxines ou le profil électrophorétique du SVF. Comme les radiations ionisantes tuent les virus, elles cassent aussi certaines protéines et décolorent le produit en réduisant le taux d’hémoglobine.

Les radiations diminuent également les métabolites du sérum (ALP, ALT, AST, LDH) et peuvent légèrement affecter la promotion de la croissance, l’efficacité du placage et l’efficacité du clonage avec certaines lignées cellulaires. Biowest vous suggère de tester vos lignées cellulaires avec du sérum irradié par des rayons gamma afin de définir l’impact potentiel du traitement sur vos applications.

Si les virus semblent modifier les résultats de vos travaux, Biowest vous propose également de tester le SVF Biopharm, notre plus haute qualité, certifié exempt de 11 virus bovins majeurs.

Un simple test PCR permet de détecter l’ADN et l’ARN de virus vivants ou morts. Le test PCR doit être associé à des tests de cultures cellulaires pour détecter les virus vivants.