à propos Foire aux questions

Zellkultur oder In-vitro-Kultur entspricht der Gesamtheit der Techniken, die es ermöglichen, Tierzellen, hauptsächlich außerhalb ihrer ursprünglichen Gewebeumgebung unter kontrollierten Überlebensbedingungen, aufrechtzuerhalten.

Ein Zellkulturmedium ist ein Medium, in dem alle für das Überleben und Wachstum der Zellen notwendigen Elemente enthalten sind. Es besteht aus einem Basismedium, einer komplexen Mischung aus Mineralsalzen, Kohlenhydraten, Vitaminen, Aminosäuren, metabolischen Vorläufern, Wachstumsfaktoren, Hormonen und Spurenelementen sowie Zusätzen wie FKS.

Serum, insbesondere Fötales Kälberserum, ist ein Produkt, das sehr reich an Proteinen, Spurenelementen sowie Wachstumsfaktoren ist, die die Zellproliferation ermöglichen. Es enthält auch Anhaftungsfaktoren, die einen „Coating“-Effekt auf dem Kunststoff des Trägers erzeugen und dadurch die Zelladhärenz erhöhen. Aufgrund der verschiedenen Komponenten, die es liefert, ist es ein unverzichtbares Produkt in der Zellkultur.

Tetracycline sind eine Familie von Breitspektrum-Antibiotika, die die bakterielle Proteinsynthese hemmen, indem sie die Bindung von Aminoacyl-tRNA an das Ribosom blockieren. Aufgrund der wachsenden Besorgnis über die Entwicklung antibiotikaresistenter Mikroben wurde der Einsatz von Tetracyclin als Wachstumsförderer in der EU Anfang der 1970er Jahre verboten. Im Rest der Welt gehört Tetracyclin jedoch immer noch zu den am häufigsten verwendeten Antibiotika in der Tierhaltung.

Seit 1992 wird das Tetracyclin-kontrollierte transkriptionelle Aktivierungssystem zur Induktion (Tet-on) oder Hemmung (Tet-off) der Expression bestimmter Gene in Zelllinien- oder Tiermodellen verwendet. Beide Systeme reagieren sehr empfindlich auf Tetracyclin, selbst in kleinen Mengen, die in FKS vorhanden sind. Die Verwendung von Tetracyclin-freiem FKS ermöglicht es, die Induktion dieser Systeme in Ihren verschiedenen Anwendungen zu kontrollieren.

Wenn Sie noch weitere Informationen brauchen, oder um Hilfe bei der Auswahl der am besten geeigneten Charge für Tetracyclin-empfindliche Anwendung zu erhalten, können Sie Ihren Biowest-Vertreter jederzeit kontaktieren.

Sofern auf den Produktetiketten nichts anderes angegeben ist, werden Biowest-Seren und flüssige Medien steril filtriert. Die Sterilität ist nach dem Öffnen nicht gewährleistet. Die Verwendung aseptischer Handhabungstechniken wird empfohlen. Die Probenahme für die Sterilitätstests aller Biowest-Produkte entspricht den Anforderungen des Europäischen Arzneibuchs (European Pharmacopoeia).

Serum liefert aufgrund seiner reichhaltigen Zusammensetzung an Proteinen, Spurenelementen und Wachstumsfaktoren alle notwendigen Nährstoffe und Bestandteile für das Überleben, die Proliferation und das Wachstum von Zellen.

Biowest gewährleistet ein hohes Niveau an Qualität, Rückverfolgbarkeit und Biosicherheit, insbesondere durch eine ISO 9001-Zertifizierung, die 2006 erworben und alle 3 Jahre von einer zugelassenen Stelle erneuert wird, eine vollständige Dokumentation und Lieferantenaudits, die in den gesamten Produktionsprozess einbezogen sind.

Serum wird bei +2°C/+8°C aufgetaut, um eine Degradierung der mitogenen Faktoren zu vermeiden. Es kann auch bei Raumtemperatur aufgetaut werden, indem es periodisch geschüttelt wird, um den Inhalt wieder in Suspension zu bringen. Temperaturen über 37°C können die Leistung des Serums beeinträchtigen, da sie den Abbau kritischer Serumfaktoren beschleunigen, und müssen im Labor vermieden werden. Das aufgetaute Serum muss vorsichtig gemischt werden, bevor es dem Zellkulturmedium hinzugefügt wird.

Nach dem Auftauen des Serums können Ausfällungen (Präzipitate) und eine Trübung auftreten. Es handelt sich dabei um Fibrinpräzipitate. Wird das Serum über einen längeren Zeitraum bei 37°C inkubiert, können zusätzlich zu den Fibrinpräzipitaten auch Kalziumphosphatpräzipitate auftreten. In beiden Fällen beeinträchtigt dies nach unserem Wissen die Leistung des Serums in der Zellkultur nicht.

Serum wird durch die Einwirkung von Wärme dekomplementiert. Dies ermöglicht die Inaktivierung der im Serum vorhandenen Komplementfaktoren. Während der Dekomplementierung wird die Überwachung der Produkttemperatur mithilfe einer Kontrollflasche zusätzlich zu der für die Zellkultur bestimmten Flasche durchgeführt. Die Flaschen werden bei +2°C/+8°C aufgetaut und dann in ein Wasserbad bei +80°C gestellt. Wenn die Temperatur der Kontrollflasche +50°C erreicht, stellen Sie den Thermostat des Wasserbades auf +70°C ein. Wenn die Temperatur der Flasche dann +55°C erreicht, senken Sie den Thermostat auf +60°C. Wenn die Temperatur der Kontrollflasche bei +56°C liegt, stellen Sie den Thermostat auf +56°C ein und lassen Sie es 30 Minuten lang inkubieren. Rühren Sie die zu dekomplementierende Flasche alle 5 bis 10 Minuten um. Überprüfen Sie die Temperatur regelmäßig. Halten Sie die Temperatur bei +56°C, indem Sie den Thermostat anpassen, kaltes Wasser hinzufügen oder den Deckel verwenden. Nach der Inkubation lassen Sie das Serum 30 Minuten lang auf Raumtemperatur abkühlen und frieren es dann bei -20°C ein.

Hinweis: Das Rühren ist entscheidend für eine gute Serumqualität. Wenn das Serum nicht richtig gemischt wird, bilden sich Präzipitate aus Salzen, Proteinen und Lipiden, die dem Serum ein geliertes Aussehen verleihen können. Diese Ablagerungen sind für die Zellkultur nicht toxisch, beeinträchtigen jedoch das Aussehen und die Konsistenz des Serums. Eine Inkubation des Serums bei +56°C über 30 Minuten hinaus kann seröse Wachstumsfaktoren verschlechtern und somit die Leistung des Serums mindern.

Serum kann zwischen +2°C/+8°C bis zu 8 Wochen gelagert werden, ohne dass seine Leistung beeinträchtigt wird (*).

(*) Art to Science, Vol.19, No.2, « Serum Stability at Refrigerated Temperatures (2-8C)

Serum sollte bei -20°C (-10°C/-40°C) eingefroren und lichtgeschützt gelagert werden. Werden sie bei Temperaturen unter -40°C gelagert, können die Flaschen brüchig werden, was das Bruchrisiko erhöht.

Hochwertiges Serum kann aus jedem Land stammen, sofern es in Übereinstimmung mit allen anwendbaren regulatorischen und industriellen Anforderungen gesammelt, importiert und verarbeitet wird. Kein Kontinent oder Land, das FKS produziert, hat einen inhärenten Vorteil in Bezug auf die Qualität im Vergleich zu anderen Herkünften.

Biowest legt besonderen Wert auf das Tierwohl. Der Produktionsprozess für tierische Seren entspricht den Grundsätzen des Tierschutzes, die von der OIE – Weltorganisation für Tiergesundheit, dem Terrestrial Animal Health Code 2012, Band I, Abschnitt 7, festgelegt wurden. Was das fetale Kälberserum betrifft, verwendet Biowest ausschließlich Blut, das als Nebenprodukt von Kühen gesammelt wird, die für den menschlichen Verzehr geschlachtet wurden.

Um eine ethische Produktion dieses Serums zu gewährleisten, haben wir Sammelverfahren eingeführt, die jedes Risiko ausschließen, dem Fötus Schmerzen zuzufügen. Das Blut des fetalen Kalbes wird nur bei Fehlen von Lebenszeichen des Fötus entnommen (OIE – Terrestrial Animal Health Code 2012, Band I, Artikel 7.5.5.).

Sofern auf den Produktetiketten nichts anderes angegeben ist, werden Biowest-Seren und flüssige Medien steril filtriert. Die Sterilität ist nach dem Öffnen nicht gewährleistet. Die Verwendung aseptischer Handhabungstechniken wird empfohlen. Die Probenahme für die Sterilitätstests aller Biowest-Produkte entspricht den Anforderungen des Europäischen Arzneibuchs (European Pharmacopoeia).

Die Maul- und Klauenseuche (MKS) ist für regulatorische Importzwecke relevant, hat aber keine Auswirkungen auf das Zellwachstum. Einige Länder, darunter die Vereinigten Staaten, genehmigen den Import von FKS nur aus MKS-freien Ländern ohne Impfung; während die meisten anderen Länder MKS-freie Länder mit Impfung akzeptieren.

Die Maul- und Klauenseuche ist in Teilen Asiens und im Großteil Afrikas und des Nahen Ostens endemisch. Die Mehrheit der lateinamerikanischen Länder hat Zonierungsmaßnahmen ergriffen und gilt als frei von Maul- und Klauenseuche mit oder ohne Impfung.

Australien, Neuseeland und Indonesien, Mittelamerika, Nordamerika und Westeuropa sind derzeit frei von Maul- und Klauenseuche. Es handelt sich jedoch um eine grenzüberschreitende Krankheit, die in normalerweise freien Gebieten punktuell auftreten kann. (https://www.woah.org/fr/maladie/fievre-aphteuse/)

Transmissible Spongiforme Enzephalopathien (TSE) sind chronische neurodegenerative Erkrankungen, die durch die Akkumulation einer abnormalen Isoform eines zellulären Glykoproteins (PrP oder Prionprotein genannt) gekennzeichnet sind. Zu den Tier-TSEs gehören unter anderem die Bovine Spongiforme Enzephalopathie (BSE) bei Rindern und Scrapie bei Schafen und Ziegen.

Rinder, Schafe, Ziegen und Tiere, die von Natur aus anfällig für eine Infektion mit TSE-Erregern sind, oder Tiere, die oral infiziert werden können und keine menschlichen oder nichthumane Primaten sind (Hirsche, Nerze, Katzenartige, exotische Huftiere), werden als „von TSE betroffene Tierarten“ definiert. Schweine und Vögel, Tierarten von besonderem Interesse für die Arzneimittelproduktion, sind nicht anfällig für eine natürliche orale Infektion.

(Auszug aus „Erläuterung zur Reduzierung des Übertragungsrisikos von tierischen spongiformen Enzephalopathie-Erregern durch Human- und Tierarzneimittel (EMA/410/01 Rev. 3)“)

Laut der OIE (Weltorganisation für Tiergesundheit) besteht kein Risiko der BSE-Übertragung in mehreren Produkten wie Milch, Häuten und Fellen, entbeintem Fleisch, Blut und Blutnebenprodukten wie Fetalem Kälberserum (OIE Terrestrial Code 11.4 BSE). Die meisten OIE-Mitgliedsländer haben diesen Standpunkt übernommen, einschließlich der Europäischen Union und der Vereinigten Staaten (USDA).

Biowest testet das Serum auf Viren (BVD, IBR, PI3) mithilfe einer Zellkulturmethode, um das Vorhandensein oder Nichtvorhandensein lebender Viren im Serum nachzuweisen.

Ein einfacher PCR-Test ermöglicht den Nachweis der DNA und RNA von lebenden oder toten Viren. Der PCR-Test muss mit Zellkulturtests kombiniert werden, um lebende Viren nachzuweisen.

Die Gamma-Bestrahlung ermöglicht es, jedes potenzielle Risiko von Viren, Bakterien und Pilzen, die im Serum vorhanden sein könnten, auszuschließen. Die Bestrahlung führt weder zu einer Veränderung der biochemischen Zusammensetzung noch zu einer signifikanten Leistungsminderung des Produkts. Das Serum kann jedoch eine dunklere Farbe aufweisen als nicht bestrahltes Serum. Biowest empfiehlt, dieses Serum im Voraus auf Ihre verschiedenen Anwendungen zu testen.

Biowest bietet auch ein überlegenes Biopharm FKS an, das als frei von 9 wichtigen Rinderviren zertifiziert ist.

La traçabilité est importante parce qu’elle fournit une chaîne d’identité du produit depuis le pays et l’abattoir d’origine, jusqu’aux sites de production, de conditionnement et d’étiquetage, prêt pour la vente et la distribution finale.

Comme vous pouvez le vérifier, la traçabilité assure que le produit que vous achetez a été fabriqué en respectant les réglementations à chaque niveau. Cette chaîne d’information ininterrompue est synonyme de transparence totale et de conformité totale.

Biowest contrôle entièrement la chaîne d’approvisionnement, de la récolte de la matière première au remplissage des bouteilles stériles.

Notre traçabilité avec le logiciel de gestion SAP S/4HANA garantit une traçabilité complète du produit, de la matière première jusqu’au produit final. Ce logiciel joue un rôle clé dans la réalisation d’une traçabilité complète du réseau d’approvisionnement, permettant à Biowest de déterminer la lignée des lots et la traçabilité globale.

Un sérum de haute qualité peut provenir de n’importe quel pays, pour autant qu’il soit collecté, importé et traité conformément à toutes les exigences réglementaires et industrielles applicables.
Aucun continent ou pays produisant du SVF n’a d’avantage inhérent, en termes de qualité, par rapport aux autres origines.

Depuis les années 1990, des cas de pratiques illégales ont fait l’objet de rumeurs. Seuls deux cas ont été signalés aux autorités.

En 2004, Biowest s’est rendue compte qu’elle avait acheté et revendu des origines fausses ; et en 2013, GE s’est rendue compte qu’elle avait vendu des produits SVF faussement présentés et frelatés, après avoir acquis la société PAA, qui avait des activités en Autriche, au Canada et en Australie.

Dans les deux cas, les victimes concernées ont été informées et les produits ont été rappelés. D’autres cas sont en cours d’investigation. Ces cas illustrent l’importance d’un contrôle complet de la chaîne d’approvisionnement.

La falisification est la plus dommageable des activités criminelles qui peuvent affecter les utilisateurs de sérum !

Le SVF peut être falsifié par l’ajout d’eau, de facteurs de croissance et/ou de sérum d’autres espèces. Des entreprises peu scrupuleuses, afin d’améliorer les performances et/ou de réduire le coût du produit, peuvent réaliser une ou plusieurs de ces activités ou d’autres similaires.
Ces pratiques sont extrêmement graves car elles affectent les résultats critiques de la recherche en sciences de la vie, ainsi que la pureté des produits finaux obtenus dans les domaines biopharmaceutique, diagnostique ou vaccinal.

Lorsque de tels cas sont détectés, les victimes ayant utilisé un produit frelaté doivent être informées pour permettre d’évaluer les dommages et de prendre des mesures correctives.

On parle de « fausse déclaration » lorsque le produit est mal étiqueté en termes d’origine déclarée, et cela peut être total ou partiel :

– « Totale », c’est lorsque le SVF provenant d’une origine moins chère est vendu comme s’il provenait d’une origine plus chère ;
– « Partielle », c’est lorsqu’une origine moins chère et une origine plus chère sont mélangées, par exemple dans la proportion 49-51, et que seule l’origine plus chère 51%- est déclarée. Cela génère un profit illicite pour le vendeur, au détriment des utilisateurs de sérum ; et peut amener les entreprises à violer, sans le savoir, les règlements d’importation ou les fichiers maîtres des produits.

Il est peu probable que les résultats réels de la recherche et les produits finis soient sérieusement affectés, mais les origines falsifiées violent les normes d’honnêteté et de traçabilité du gouvernement, de l’industrie et des consommateurs.

La « contrebande » est un moyen de faire de fausses déclarations, et peut prendre la forme de l’importation d’un produit sous une fausse description ; directement vers une destination finale, ou via un pays tiers.

Les lignes directrices de l’OIE en matière de bien-être animal sont respectées dans les pays où le SVF est collecté (Code terrestre 7.5 de l’OIE sur l’abattage des animaux).

Voir EFSA – Bien être animal

Il existe des alternatives sans sérum spécifiques aux lignées cellulaires, notamment Biowest FreeAdd (S6010).

Dans la plupart des cas, une adaptation cellulaire est nécessaire, les rendements sont plus faibles et les coûts plus élevés.

L’abattage d’animaux gestants est, dans la plupart des cas, un événement non planifié. La fréquence dépend des techniques d’élevage. Dans la plupart des cas, l’état de gestation n’est pas connu. C’est le cas par exemple des bovins qui se déplacent librement et que les génisses et les bœufs sont mélangés.

Aucune vache n’est tuée dans le but principal de récolter le sang fœtal. Le sang est collecté comme sous-produit des opérations d’abattage des bovins pour la viande bovine. L’état de gestation est inconnu lorsqu’un animal entre dans la chaîne d’abattage. Le pourcentage de vaches enceintes allant à l’abattoir est très faible et diminue d’année en année grâce à l’amélioration constante des techniques d’élevage.

La collecte du sang se fait sans causer de douleur au fœtus. La vie du fœtus prend fin par épuisement de l’oxygène, méthode généralement reconnue comme étant douce pour mettre fin à la vie.

La technologie de la culture cellulaire peut réduire l’utilisation d’animaux vivants dans la science. Des recherches sont également menées pour produire de la viande par culture cellulaire, ce qui pourrait à terme conduire à la fin de l’élevage d’animaux pour l’alimentation.

Sauf indication contraire sur les étiquettes des produits, les sérums et les milieux liquides Biowest sont filtrés de manière stérile. La stérilité n’est pas garantie après ouverture. L’utilisation de techniques de manipulation aseptiques est recommandée.

La fièvre aphteuse est pertinente à des fins d’importation réglementaire, mais pas pour la croissance cellulaire. Les États-Unis et quelques autres pays n’autorisent les importations de SVF qu’en provenance de pays exempts de fièvre aphteuse, SANS vaccination, tandis que la plupart des autres pays acceptent les pays exempts de fièvre aphteuse AVEC vaccination.

Les pays exempts de foyers de fièvre aphteuse et de virus de la fièvre aphteuse en circulation, comme l’a vérifié l’OIE, et sont déclarés également sûrs.

L’encéphalopathie spongiforme bovine (ESB), plus connue sous le nom de maladie de la « vache folle », est une maladie neurodégénérative (encéphalopathie) mortelle chez les bovins.

Selon l’OIE (Organisation mondiale de la santé animale), il n’y a aucun risque de transmission de l’ESB dans plusieurs produits, notamment : le lait, les cuirs et les peaux, la viande désossée, le sang et les sous-produits du sang, tels que le sérum de veau fœtal (Code terrestre 11.4 ESB de l’OIE).

La plupart des pays membres de l’OIE ont adopté cette position, y compris l’Union européenne et les États-Unis (USDA). Pendant un certain temps, l’ESB a été un argument utilisé en faveur de certaines origines. Après que l’OIE ait déterminé que l’ESB n’est pas transmise par les produits sanguins, ces arguments sont devenus obsolètes.

L’échantillonnage pour les tests de stérilité de tous les produits Biowest est conforme aux exigences de la Pharmacopée européenne.

Biowest teste le sérum pour les virus (BVD, IBR, PI3) en utilisant une méthode de culture cellulaire, de sorte à détecter la présence ou non de virus vivant dans le sérum.

Le SVF est parfois irradié aux rayons gamma afin d’éliminer tout risque potentiel de virus.

Au dosage standard de rayons gamma, aucune perte de performance n’est observée sur les premières générations de cellules. Nous ne constatons aucun changement sur les hormones, l’osmolarité, le pH, les endotoxines ou le profil électrophorétique du SVF. Comme les radiations ionisantes tuent les virus, elles cassent aussi certaines protéines et décolorent le produit en réduisant le taux d’hémoglobine.

Les radiations diminuent également les métabolites du sérum (ALP, ALT, AST, LDH) et peuvent légèrement affecter la promotion de la croissance, l’efficacité du placage et l’efficacité du clonage avec certaines lignées cellulaires. Biowest vous suggère de tester vos lignées cellulaires avec du sérum irradié par des rayons gamma afin de définir l’impact potentiel du traitement sur vos applications.

Si les virus semblent modifier les résultats de vos travaux, Biowest vous propose également de tester le SVF Biopharm, notre plus haute qualité, certifié exempt de 11 virus bovins majeurs.

Un simple test PCR permet de détecter l’ADN et l’ARN de virus vivants ou morts. Le test PCR doit être associé à des tests de cultures cellulaires pour détecter les virus vivants.