Sobre Preguntas generales

El suero se descongela a 2-8°C para evitar su degradación; alternativamente, puede descongelarse a temperatura ambiente con agitación periódica para resuspender el contenido.

El suero descongelado debe mezclarse bien antes de añadirlo al medio de cultivo celular.

Las temperaturas superiores a 37°C pueden comprometer el rendimiento del suero al acelerar la degradación de factores críticos del suero, y deben evitarse en el laboratorio.

Puede haber turbidez y material floculento tras la descongelación o tras una congelación y/o refrigeración prolongadas. Nuestra experiencia indica que estas modificaciones no afectan al rendimiento biológico del suero.

Algunos de los precipitados se deben a la fibrina:
Nuestros procedimientos de recogida y congelación rápida pueden dejar algo de fibrinógeno en el suero.
El fibrinógeno es el precursor soluble de la proteína formadora de coágulos, la fibrina. La fibrina puede aparecer tras la descongelación o la inactivación por calor. La fibrina no altera la capacidad del suero para promover el crecimiento celular.

Se recomienda utilizar el suero sin tratamiento (filtración o centrifugación).
Algunos precipitados se deben al fosfato de calcio:
El suero que se incuba a 37°C durante periodos prolongados se enturbia y pueden aparecer depósitos. Están compuestos de calcio y fósforo.
Hasta donde sabemos, esto no altera el rendimiento del suero en cultivos celulares.

Para la mayoría de las aplicaciones de cultivo celular, no se recomienda la inactivación térmica del suero. La inactivación por calor degrada las proteínas del complemento que pueden interferir con los ensayos inmunológicos.
Calentar el suero durante períodos prolongados puede reducir o destruir los factores de crecimiento, así como aumentar la formación de depósitos que suelen confundirse con contaminación microbiana.

Comenzar descongelando el suero y el frasco de suero de control a 2-8 °C.
Agite el suero embotellado para evitar que se forme un precipitante durante la descongelación y, a continuación, colóquelo en el baño de agua ajustado a 80 °C.

Cuando la temperatura de la botella de control alcance los 50 °C, ajustar el termostato del baño a 70 °C; cuando la temperatura de la botella alcance los 55 °C, cambiar el termostato a 60 °C.

Cuando el suero alcance la temperatura de 56 °C, utilice un temporizador (30 minutos es el tiempo registrado) y cambie el termostato del baño de agua a 56 °C. Durante esos 30 minutos, compruebe regularmente la temperatura y manténgala estable ajustando el termostato, añadiendo un poco de agua fría y bajando o no la tapa. Remover el suero cada 5 o 10 minutos.

Mantener el suero a temperatura ambiente durante 30 minutos y, a continuación, congelarlo a -20 °C.

Nota:
La agitación es crucial para una buena calidad del suero. Si el suero no se mezcla correctamente, aparecerá un precipitante de sales, proteínas y lípidos que permitirá la formación de depósitos cristalinos y de floculación. Estos depósitos no son tóxicos para el cultivo celular, pero afectan al aspecto y la consistencia del suero. Calentar el suero durante periodos prolongados puede destruir los promotores del crecimiento, lo que también puede permitir la formación de depósitos.

El suero puede almacenarse entre +2 y +8 ° durante un máximo de 8 semanas sin que disminuya su rendimiento (*).

Estudios internos de Biowest han demostrado que durante 26 semanas de almacenamiento (entre +2 y +8 °C) no se alteró significativamente la capacidad del suero para promover el crecimiento celular.

(*) Art to Science, Vol.19, No.2, Serum Stability at Refrigerated Temperatures (2-8 °C).

El suero debe conservarse congelado y protegido de la luz.
La temperatura de almacenamiento recomendada es de -10 °C a -40 °C.

A temperaturas inferiores a -40 °C, los frascos pueden volverse quebradizos, aumentando el riesgo de rotura.

Algunos preparados de tripsina contienen rojo fenol. Dado que el producto se envía con hielo seco, podría producirse una importante acumulación de CO₂ en el envase.

Este CO₂ puede entrar en la solución y bajar ligeramente el pH, dando un color anaranjado (alrededor de pH 6,5) frente a rosado (alrededor de 7,3). La solución, si es naranja (ácida) puede seguir siendo buena para usar tal cual, o puede añadirse hidróxido de sodio para ajustar el pH.

Las tetraciclinas son una familia de antibióticos de amplio espectro que inhiben la síntesis proteica bacteriana bloqueando la unión del aminoacil-ARNt al ribosoma. Debido a la creciente preocupación por el desarrollo de microbios resistentes a los antibióticos, el uso de la tetraciclina como promotor del crecimiento se prohibió en la UE a principios de la década de 1970.

Sin embargo, en el resto del mundo la tetraciclina sigue siendo uno de los antibióticos más utilizados en el ganado.

Desde 1992, el sistema de activación transcripcional controlado por tetraciclina, o sistemas “Tet-Off” y “Tet-On”, como se les suele llamar, se ha utilizado para inducir la expresión de mamíferos en modelos de líneas celulares utilizados en laboratorios de todo el mundo. En el sistema Tet-Off, la expresión génica se silencia si la tetraciclina está presente y la inducción de la expresión se realiza mediante la eliminación de la tetraciclina del medio.
Viceversa, en el sistema Tet-On, la expresión génica se silencia en ausencia de tetraciclina y se induce mediante la adición de tetraciclina a los medios de cultivo celular.

Ambos sistemas son muy sensibles incluso a las pequeñas cantidades de tetraciclina presentes en el FBS. Por ello, si un investigador utiliza estas herramientas para controlar la expresión génica en sus modelos de cultivo celular, es muy importante disponer de un suministro de FBS completamente libre de tetraciclina.

No dude en ponerse en contacto con su representante de Biowest para obtener más información u orientación a la hora de seleccionar el lote más adecuado para su aplicación sensible a la tetraciclina.

El suero humano procedente de donantes del tipo AB es deficitario en anticuerpos contra los antígenos de los tipos sanguíneos A y B. Por lo tanto, minimiza la inmunorreactividad, ya que la mayoría de los usuarios de suero humano trabajan con células del sistema inmunitario.

Las mujeres que han estado embarazadas pueden desarrollar anticuerpos contra antígenos de la clase mayor de histocompatibilidad (MHC) presentes en las células del padre y/o del feto.

Los donantes masculinos no presentan esos riesgos

Existe una amplia gama de aplicaciones para el suero fetal bovino. La más importante es en el campo de los productos biofarmacéuticos y las vacunas. Se utiliza en la investigación, fabricación y control de vacunas humanas y veterinarias y de fármacos, muchos de los cuales se encuentran en la vanguardia del desarrollo de medicamentos.

El suero fetal bovino también se utiliza mucho en investigación

La FBS se recoge de los fetos de vacas preñadas, sacrificadas de acuerdo con las directrices de la OIE (Organización Mundial de Sanidad Animal) y las normas de inspección veterinaria aceptadas internacionalmente.

La OIE (Organización Mundial de Sanidad Animal) es una organización intergubernamental creada en 1924. En 2011, la OIE contaba con 178 países y territorios miembros.

Sus misiones son:

• garantizar la transparencia de la situación zoosanitaria mundial
• recopilar, analizar y difundir información científica veterinaria
• aportar su experiencia y fomentar la solidaridad internacional en la lucha contra las enfermedades animales
• salvaguardar el comercio mundial mediante la publicación de normas sanitarias para el comercio internacional de animales y productos de origen animal
• mejorar el marco jurídico y los recursos de las Organizaciones Nacionales de Servicios Veterinarios.

El FBS es esencialmente un producto natural.

Todos los lotes de FBS son únicos, con características específicas, diferentes de todos los demás lotes.

La disponibilidad de FBS está disminuyendo.

Los precios de la carne y los terneros aumentan a medida que los consumidores de algunos países incrementan el consumo de carne de vacuno y que las técnicas de cría de ganado mejoran permanentemente.

Estos factores combinados conducen a una menor frecuencia de vacas preñadas en el matadero. La recogida de FBS en nuevos países ha compensado durante muchos años la disminución de la oferta, pero ahora ya no quedan nuevos países productores.

La oferta mundial actual de FBS es escasa y seguirá disminuyendo.

El origen del suero no influye en el crecimiento celular. Biowest ha comparado el crecimiento celular en FBS de siete países diferentes de tres continentes, y ha confirmado que, independientemente del país de origen, todas las líneas celulares probadas tenían el mismo rendimiento medio.

Un lote de FBS puede funcionar bien para una línea celular específica, pero no para otra. La “”calidad del suero”” es específica para cada línea celular. Por este motivo, las pruebas de FBS se utilizan ampliamente cuando se trata de líneas celulares sensibles. Biowest realiza los análisis más exhaustivos de parámetros bioquímicos y pruebas en líneas celulares de la industria, poniendo a su disposición los resultados en los Certificados de Análisis.

Existe una enorme diferencia de precios entre los países clasificados como “libres de fiebre aftosa sin vacunación”, en los que la demanda supera a la oferta, y los países clasificados como “libres de fiebre aftosa con vacunación”, en los que la oferta ha superado históricamente a la demanda.

La diferencia de precios ha sido de varios cientos por ciento, por lo que los usuarios de suero en los EE.UU. han pagado miles de millones de dólares más que los usuarios de suero en la UE. Las propuestas del USDA para armonizar las normas de importación de EE.UU. y la UE para FBS en relación con la fiebre aftosa (siguiendo las directrices de la OIE), han sido rechazadas en repetidas ocasiones por la industria de sueros de EE.UU.

La fuente del suero es de un país aprobado por el USDA. Esto significa que el suero se produce a partir de sangre recogida en países que han sido aprobados por el Departamento de Agricultura de Estados Unidos (USDA) para exportar productos de suero de rumiantes a Estados Unidos.

Los países elegibles que exportan suero fetal bovino a los EE.UU. incluyen: Australia, Canadá, Chile, Costa Rica, El Salvador, Guatemala, Honduras, México, Nueva Zelanda, Nicaragua y Panamá.

La demanda de FBS crece a la par que los últimos avances en investigación, como las células madre, la terapia celular, las nuevas vacunas y la proteómica.

Los precios de los FBS australianos son más altos porque Australia se percibe como un origen “”más seguro”” para la EEB y los virus del ganado.

Canadá y Australia fueron los primeros países fuera de EE.UU. donde se produjo FBS. En los años 80, los casos de EEB que se produjeron en Norteamérica se convirtieron en un argumento de peso a favor de las FBS australianas.

Se argumentó que, al estar “”aislada””, Australia era necesariamente el origen más seguro.

Las importaciones de FBS en la UE están menos restringidas que en EEUU. Una propuesta realizada por el USDA en 1994 para aplicar las mismas políticas de importación de FBS que la UE no obtuvo el apoyo de la industria estadounidense de FBS.

La Asociación Internacional de la Industria del Suero (ISIA) apoya los esfuerzos para armonizar las normas de importación, sugiriendo el cumplimiento de las recomendaciones de la OIE. Mientras tanto, el FBS en EE.UU. sigue siendo más del doble de caro que en Europa.

La trazabilidad es importante porque proporciona una cadena de identidad del producto desde el país y el matadero de origen, hasta las instalaciones de transformación, envasado y etiquetado, listo para su venta y distribución final.

Como puede comprobar, la trazabilidad garantiza que el producto que compra se ha fabricado respetando la normativa en cada nivel. Esta cadena ininterrumpida de información significa transparencia total y cumplimiento íntegro.

Biowest controla completamente la cadena de suministro, desde la recogida de la materia prima hasta el llenado de botellas estériles.

Nuestra trazabilidad con el software de gestión SAP S/4HANA garantiza la trazabilidad completa del producto, desde la materia prima hasta el producto final. Este programa de software desempeña un papel clave para lograr la trazabilidad completa de la red de suministro: permite a Biowest determinar el linaje de los lotes y la trazabilidad global.

El suero de alta calidad puede proceder de cualquier país, siempre que se recoja, importe y procese siguiendo todos los requisitos reglamentarios e industriales aplicables.
Ningún continente o país que produzca FBS tiene una ventaja inherente, en términos de calidad, sobre otros orígenes.

Desde la década de 1990, de vez en cuando se rumorean casos de prácticas ilegales. Solo se tiene constancia de dos casos denunciados a las autoridades.

En 2004, Biowest se dio cuenta de que había comprado y revendido orígenes tergiversados; en 2013, GE se dio cuenta de que había vendido productos FBS tergiversados y adulterados, tras adquirir la empresa PAA, con actividades en Austria, Canadá y Australia.

En ambos casos se informó a las víctimas afectadas y se retiraron los productos. Se sabe que se están investigando otros casos. Estos casos ilustran la importancia de tener un control total de la cadena de suministro.

¡La adulteración es la más perjudicial de las actividades delictivas que pueden afectar a los usuarios de suero!

Los FBS pueden adulterarse añadiendo agua, factores de crecimiento y/o suero de otras especies. Empresas sin escrúpulos, con el fin de mejorar el rendimiento y/o reducir el coste del producto, pueden llevar a cabo una o varias de estas actividades u otras similares.
Estas prácticas son extremadamente graves, ya que afectan a resultados críticos de la investigación en ciencias de la vida y a la pureza de los productos finales obtenidos en biofarmacia, diagnóstico o vacunas.

Cuando se detectan estos casos, las víctimas que han utilizado producto adulterado deben ser informadas para que sea posible evaluar los daños y tomar medidas correctoras.

“Falseamiento” es cuando el producto está mal etiquetado en cuanto al origen declarado, y puede ser total o parcial:

• “Total” es cuando se vende FBS de un origen menos caro como si fuera de un origen más caro;
• “Parcial”, cuando se mezclan un origen menos caro y otro más caro, por ejemplo en la proporción 49-51, y solo se declara el origen más caro (51%). Esto genera un beneficio ilícito para el vendedor, a expensas de los usuarios del suero; y puede hacer que las empresas infrinjan sin saberlo la normativa de importación o los archivos maestros de productos.

Es poco probable que los resultados reales de la investigación y los productos finales se vean seriamente afectados, pero los orígenes falsificados violan las normas de honestidad y trazabilidad del gobierno, la industria y los consumidores.

El “contrabando” es una forma de tergiversación, y puede consistir en importar un producto con una descripción falsa; directamente a un destino final, o a través de un tercer país.

Las directrices de la OIE sobre bienestar animal se respetan en los países en los que se recogen las FBS (Código Terrestre de la OIE 7.5 Sacrificio de animales).

Enlace a la explicación de la EFSA: Bienestar animal Artículo de la EFSA

Véase el artículo “El suero fetal bovino y el sacrificio de vacas preñadas: Bienestar animal y ética”

Existen algunas alternativas sin suero específicas para líneas celulares, como Biowest FreeAdd (número de catálogo S6000).

En la mayoría de los casos, es necesario adaptar las células, los rendimientos son más bajos y los costes más elevados.

El sacrificio de animales preñados es, en la mayoría de los casos, un acontecimiento imprevisto. La frecuencia depende de las técnicas de cría. En la mayoría de los casos, se desconoce el estado de gestación. En el caso del ganado vacuno que se desplaza libremente con novillas y novillos juntos.

No se mata a ninguna vaca con el objetivo principal de recoger la sangre fetal. La sangre se recoge como subproducto de las operaciones de sacrificio del ganado para la carne de vacuno. El estado de gestación se desconoce cuando un animal entra en la cadena de sacrificio. El porcentaje de vacas preñadas que van al matadero es muy bajo y disminuye año tras año a medida que mejoran constantemente las técnicas ganaderas.

La extracción de sangre se realiza sin causar dolor al feto. La vida del feto termina mediante el agotamiento del oxígeno, lo que generalmente se considera un método suave de terminación de la vida.

La tecnología de cultivo celular puede reducir el uso de animales vivos en la ciencia. También se está investigando la producción de carne mediante cultivo celular, lo que podría acabar con la cría de animales para la alimentación.

Excepto cuando se notifique en las etiquetas de los productos, los sueros y medios líquidos de Biowest son estériles filtrados. No se garantiza la esterilidad una vez abiertos. Se recomienda el uso de técnicas de manipulación asépticas.

La fiebre aftosa es relevante a efectos de importación reglamentaria, pero no para el crecimiento celular. Estados Unidos y algunos otros países solo permiten la importación de FVS procedentes de países libres de fiebre aftosa SIN vacunación, mientras que la mayoría de los demás países aceptan países libres de fiebre aftosa CON vacunación.

Los países libres de brotes de fiebre aftosa y de virus circulantes de fiebre aftosa, verificados por la OIE, también se declaran seguros.

La encefalopatía espongiforme bovina (EEB), más comúnmente conocida como enfermedad de las “vacas locas”, es una enfermedad neurodegenerativa (encefalopatía) mortal del ganado vacuno.

Según la OIE (Organización Mundial de Sanidad Animal), no existe riesgo de transmisión de la EEB en varios productos, entre ellos: la leche, las pieles, la carne deshuesada, la sangre y los subproductos sanguíneos, como el suero fetal bovino (Código Terrestre de la OIE 11.4 EEB). La mayoría de los países miembros de la OIE han adoptado esta posición, incluidos la Unión Europea y Estados Unidos (USDA).

Durante algún tiempo, la EEB fue un argumento utilizado a favor de determinados orígenes. Después de que la OIE haya determinado que la EEB no se transmite por los productos sanguíneos, estos argumentos han quedado obsoletos.

El muestreo para las pruebas de esterilidad de todos los productos Biowest se ajusta a los requisitos de la Farmacopea Europea.

Biowest analiza el suero para detectar los virus (BVD, IBR, PI3) mediante un método de cultivo celular, de modo que los virus vivos, si están presentes, se detectan en el suero.

El FBS se irradia a veces con rayos gamma para eliminar todos los riesgos potenciales de virus.

Con una dosis estándar de irradiación gamma, no se observa ninguna pérdida de rendimiento en las primeras generaciones de células. No observamos cambios en las hormonas, la osmolaridad, el pH, las endotoxinas ni el perfil electroforético del FBS. Como las radiaciones ionizantes matan los virus, también rompen algunas proteínas y decoloran el producto reduciendo el nivel de hemoglobina.

Las radiaciones también disminuyen los metabolitos séricos (ALP, ALT, AST, LDH) y pueden afectar ligeramente a la promoción del crecimiento, la eficiencia de la siembra en placas y la eficiencia de la clonación con algunas líneas celulares.
Biowest le sugiere que pruebe sus líneas celulares con suero irradiado con rayos gamma para definir el impacto potencial del tratamiento en sus aplicaciones.

Si los virus parecen modificar los resultados de su trabajo, Biowest también le propone que pruebe FBS Biopharm, nuestro suero de mayor calidad, certificado libre de 11 de los principales virus del ganado.

Una simple prueba PCR detectará ADN y ARN tanto de virus vivos como muertos. Las pruebas PCR deben combinarse con pruebas de cultivos celulares para detectar virus vivos.